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        原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50) 分子生物試劑

        • 更新時間:  2023-07-27
        • 產品型號:  74104
        • 簡單描述
        • 原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50)
          從細胞、組織或酵母中純化至多100 μg的總RNA

          數分鐘內快速純化得到高品質總RNA
          即用型RNA在各種下游應用中表現良好
          少量起始樣本,RNA產量穩定
          無需酚/ 氯仿抽提,無需氯化銫梯度離心,無氯化鋰或者乙醇沉淀步驟
        詳細介紹

        原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50)



        RNeasy Mini Kit可從細胞、組織或酵母中快速純化高品質RNA,硅膠膜RNeasy離心柱的結合能力達100 μg RNA。使用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent可方便的穩定組織樣本,使用TissueRuptor或TissueLyser體系可有效的破碎組織。可在QIAcube全自動核酸純化儀上應用RNeasy Mini Kit實現RNA純化自動化。處理更小或更大的樣本,可使用RNeasy Micro Kit(離心柱結合能力為45 µg RNA)、RNeasy Midi Kit(離心柱結合能力為1 mg RNA)和RNeasy Maxi Kit(離心柱結合能力為6 mg RNA)。

        RNeasy Mini實驗方案。

        使用RNeasy Mini Kit純化的總RNA具有高質量,適用于多種下游操作。實驗方案還包括部分純化的RNA、體外轉錄本和酶反應RNA的回收。不提供溶壁酶、酵母裂解酶或玻璃珠(酵母樣本需要)。因樣本來源的發育階段、種屬和生長條件的不同,從樣本中分離的RNA量也各異。由于RNA酶步驟富集的RNA種屬>200 nt,因此RNA產量不包括5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA。

        從多種樣本中純化高品質RNA。

        使用RNeasy Maxi Kit純化的總RNA的甲醛瓊脂糖凝膠電泳和northern印跡。從各種來源的樣本中分離總RNA(10 µg)上樣至各泳道。所有組織均來源于小鼠。酵母:Saccharomyces cerevisiae;E. coli菌株:HB101。32P標記的探針識別的(G)GAPDH;(E)翻譯延長因子EF-1α;和(O)外膜蛋白A序列。(E和O分別由瑞士巴塞爾大學的P. Philippsen和德國蒂賓根馬克斯-普朗克生物學研究所的U. Henning提供。)B. subtilis未采用探針檢測。M:0.24–9.5 kb RNA分子量標準。胚胎、Huh7和HeLa細胞泳道中的7.5 kb條帶(圖示)為核前體RNA。

        對少至100個細胞的RNA進行RT-PCR。

        使用RNeasy Mini Kit從圖示數目的HeLa細胞中分離的總RNA的RT-PCR。使用不含RNA酶的DNA酶酶切10 µl(1/5)洗脫液,并使用oligo-dT引物進行逆轉錄。使用2.5 µl(1/20)的cDNA混合物進行50 µl PCR。擴增452 bp的GAPDH片段。C-:陰性對照;C+:陽性對照;M:100 bp分子量標準。

        RNeasy Mini離心柱。

        RNeasy Mini Kit中提供RNeasy Mini離心柱。


        原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50)


        性能

        RNeasy Mini Kit可從至多30 mg動物或人類組織樣本,或從100–1 x 107個動物或人類細胞樣本或酵母中純化總RNA。

        RNeasy Mini Kit純化得到的總RNA產量
        樣本來源起始材料平均產量(µg)
        動物細胞
        LMH
        HeLa
        COS-7
        淋巴細胞(未受激)

        1 x 106
        1 x 106
        1 x 106
        1 x 106

        12
        15
        35
        0.5
        小鼠組織



        10 mg
        10 mg
        10 mg

        40
        10
        35
        真菌細胞
        S. cerevisiae

        1 x 107

        25
        原理

        RNeasy Mini Kit可從少量的樣本中高效純化總RNA。RNeasy純化技術整合了ben酚/異硫氰酸胍裂解的嚴謹性和硅膠膜純化的速度和純度,簡化了總RNA純化技術。純化得到高品質的RNA,并且DNA殘留水平達到zui低。

        操作流程
        RNeasy Mini Kit可從10–1 x 107個動物或人類細胞中、0.5–30 mg動物或人類組織中或小于5 x 107個酵母細胞中方便的純化總RNA。先對樣本進行破碎和勻漿。在裂解物中加入乙醇以提供合適的結合條件。然后將裂解物上樣至RNeasy硅膠膜。RNA結合到膜上(最多可結合100 µg),污染物被高效洗去。對于某些對少量DNA十分敏感的RNA應用,可在RNeasy操作過程中進行柱上DNA酶處理,去除DNA殘留。之后可在30–100 µl的純水洗脫液中得到高濃度的純化RNA。還有各種特殊應用的實驗方案可供選擇。
        應用

        使用RNeasy技術純化得到的RNA的A260/280比為1.9–2.1(10 mM Tris-·Cl、pH 7.5的溶液中),適用于多種下游應用,包括:

        Northern印跡、點印跡和狹縫印跡
        終點式RT-PCR
        定量real-time RT-PCR
        芯片分析
        Poly A+ RNA篩選
        特點
        參數
        ApplicationsPCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray
        Elution volume30–100 µl
        FormatSpin column
        Main sample typeTissue, cells
        ProcessingManual (centrifugation)
        Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or proteinTotal RNA
        Sample amount0.5–30 mg
        TechnologySilica technology
        Time per run or per prep20 minutes
        YieldVaries




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